吖啶橙染色
吖啶橙染色法检测细胞凋亡
实验试剂、仪器：
吖啶橙，稀释液PBS（磷酸缓冲液pH7.0～7.2），1％吖啶橙贮存液，细胞爬片，载玻片，盖玻片，荧光显微镜。
吖啶橙： 3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C 17 H 19 N 3 · HCl · ZnCl 2 , 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光， 与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光 。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在荧光显微镜下观察， 吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光 ；而 在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失 。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
实验步骤：
1. 配置吖啶橙贮存液 （ 1% ） ： 300 mg吖啶橙溶解于 3 0ml PBS缓冲液中，滤过， 4度避光保存。
2. 染色时， 稀释 100倍至终浓度为0.01%。 取 300 微升的 PBS 缓冲液，加 3 微升的吖啶橙贮存液混匀，室温避光染色 5 min。
3. 在荧光显微镜下选520nm的激发光观察。
实验结果：
正常细胞核的DNA为黄色或黄绿色均匀荧光，细胞质和核仁的RNA为桔黄或桔红荧光。出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色荧光，甚至见黄绿色碎片。细胞坏死时，细胞质内黄绿色或桔黄色荧光均减弱或消失 。