管腔形成实验
(一)什么是管室形成实验
管壁(比如血管、淋巴管 等等)上的内皮细胞具有一种和其他细胞不同的特殊能力,可以在合适的环境下形成管状结构(因为研究的主要是血管内皮细胞,也叫血管形成实验)。研究非内皮细胞(比如肿瘤细胞)的“管室形成能力”,均指的是该类细胞“对内皮细胞管室形成能力的调控作用”,需要两种细胞共培养完成。检查管壁内皮细胞形成管室的能力。在肿瘤细胞中的应用较多,血管生长是肿瘤发生的关键步骤。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且适合研究药物对这一过程的影响。
(二)实验步骤:
Step1:细胞培养
Step2:细胞转染或药物处理
Step3:铺Matrigel胶
Step4:接种细胞
Step5:观察血管生成情况
这里要注意啦,根据我们的经验,细胞转移到Matrigel中6h以内观察血管形成,超出6h这种现象会开始逐渐减弱消失。
(三)血管形成的实验过程比较简单,但是操作中也可能遇到一些小小的问题需要特别注意,主要有以下两点:
1. 铺基质胶时,经常会产生气泡,这时候怎么办呢?
首先用枪头吸胶时不要吸空,加进孔板时枪头最后剩余一点胶不打出,若已有气泡产生可用尖头镊子戳破。
2. 细胞加入基质胶上4-6小时后没有观察到血管生成?
一方面有可能细胞计数不准确,另一方面可能是细胞的处理影响了细胞成管。