成球实验
（一）、什么是细胞成球能力呢？
正常情况下贴壁细胞是无法在悬浮环境下存活的。而干细胞（包括正常干细胞、肿瘤干细胞）特有的干性，使细胞自己在悬浮环境下具有自我更新的能力。干细胞能分化出不同表型，在添加了生长因子的无血清培养基中能培养形成细胞球。细胞成球一般应用于肿瘤干细胞中。
成球能力是干细胞体外鉴定的一个重要方法，其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力，一般用细胞球形成效率表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌，它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球，而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则相对成球困难些。
（二）了解了细胞成球的原理及应用，接下来看看具体的实验步骤：
Step1：细胞培养
Step2：细胞转染或药物处理
Step3：将细胞接种于超低粘附培养板中，以无血清培养基培养
Step4：每天观察细胞的成球情况。并在20×10倍显微镜下拍照记录细胞的成球情况。
是不是非常的简单呢？（虽然看着简单，但是一般要连续培养和观察近1个月呢~贵在坚持！）
实验步骤虽说很简单，但是想要成功，实验细节的把握还是很重要的。
（三）、那么细胞成球实验需要注意的问题有哪些呢？
1. 细胞接种密度如何确定？
细胞接种密度需要摸索。低密度常用于元代肿瘤干细胞的提取，筛选可以非粘附生长的细胞。高密度用于细胞球的扩增，一般来说5000/ml以上。
2. 细胞球消化时常用的酶？
细胞球传代需要用弱的消化酶，常用的有Accutase，Tryple Express、Dispase。
（四）经验
1、丁香通：克隆形成和细胞成球两个实验的基础概念都建立在同一批同株肿瘤细胞内也存在亚群差异，并不是所有肿瘤细胞都有无限增殖和集落形成能力，而所检测的实际就是对照组和实验组中具有更强恶性潜能的亚群细胞所占比例的相对高低，间接反应二者恶性增殖能力高低。其中细胞成球的条件更苛刻，采用的是无血清，添加一定生长因子的悬浮条件，直接把这个有更高恶性能力的亚群指向肿瘤干样细胞，所以细胞成球都用于肿瘤干性影响的功能实验。而CCK8就是检测活细胞的相对含量，根据定量定时，检测改变，相对可以代表增殖能力。另外两个实验就不用多说了，成球实验建议楼主采用低粘附的96孔板，极限稀释，种细胞数梯度从10-100，不要超过100个。很多文献用24孔甚至6孔，种细胞个数甚至10的5次方级，还能计数，真的是天方夜谭。
2、其他人实验经验
一、材料：
1）1640（或DMEM）/F12培养基：购自Invitrogen公司，于4°C保存。
2）B27supplement:购自Invitrogen公司，于-20°C保存。
3）重组表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）：购自R&D公司，于-20°C保存。
4）低黏附6孔板，购自康宁，(corning:3471)
二、操作步骤
1）配制无血清培养基：1640（或DMEM）/F12+B27+ EGF+ bFGF（终浓度均为20ng/ml）（注意：培养液配好后最好用0.22μM的过滤器过滤）
2)收集对数生长期的细胞，PBS洗1次，1640（或DMEM）/F12无血清培养基重悬，计数。
3）以1000个/孔的密度接种至低粘附6孔板，根据需要做相应的的处理（加药之类的）加入3ml DMEM/F12无血清培养基，静置培养7-14天，期间不用换液，可在显微镜下观察细胞大小。（注意：每次移动板的时候都要非常小心，以免成球的细胞被撞碎了）
4）显微镜下计数大于50个细胞的悬浮球囊，并拍照。